產(chǎn)品說明：脂質(zhì)過氧化物（lipid hydroperoxide LPO）是不飽和脂肪酸鏈經(jīng)自由基或活性氧作用后產(chǎn)生的過氧化物。病理情況下，脂質(zhì)過氧化反應增強可導致原本低含量的 LPO 升高。LPO 含量升高會對細胞的結(jié)構(gòu)和功能造成損傷，LPO含量與機體免疫系統(tǒng)和衰老密切相關(guān)。LPO 在酸性條件下加熱產(chǎn)生丙二醛（MDA），MDA 與硫代巴比妥酸(Thiobarbituric acid，TBA)縮合，生成棕紅色物質(zhì)三甲川（3,5,5-三甲基惡唑-2,4-二酮），其最大吸收波長在 532nm，進行比色后可估測樣本中 LPO 的含量。
注意：實驗之前建議選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、1mL 玻璃比色皿、冰和蒸餾水。
溶液的配制：1. 試劑二：臨用前取 1 瓶試劑二加入 14mL 蒸餾水，此試劑較難溶，可以 70℃加熱并劇烈振蕩以促進溶解，或者通過超聲處理以促進溶解。每次用前需檢查是否有粉劑析出。用不完的試劑可在 2-8℃中保存一個月。2. 標準品：為 1000nmol/mL 的標準溶液。
操作步驟：一、樣本處理（可適當調(diào)整待測樣本量）1、組織：按照樣本質(zhì)量（g）：提取液體積（mL）為 1:5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液）加入提取液，冰浴勻漿；8000g 4℃離心 10min，取上清置冰上待測。Heating MDA+ TBAH+3,5,5-Trimethyloxazolidine-2,4-dione (532 nm)H+LPOHeating2、細菌或細胞樣本：收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清，按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為 500~1000:1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液）加入提取液，超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 7s，總時間 3min），8000g 4℃離心 10min，取上清置冰上待測。3、培養(yǎng)液或其他液體：直接檢測。若溶液渾濁則離心后取上清進行測定。
注意事項：1. 待測液如果有密集小氣泡，建議靜置 20min 左右等待氣泡消失再測，以免影響測定結(jié)果，如果有少量氣泡可以通過低速離心或輕磕等方式來消除。2. 待測液如果尚未澄清，可吸取上清液后再次離心。3. 為防止水浴 60min 過程中水分散失，建議使用螺旋管或用封口膜給 EP 管纏口。4. 如果用高溫助溶試劑二，需要待其冷卻至室溫后再使用。5. 如果測定吸光值過低或接近空白，適當延長反應時間或加大樣本量后，重新測定。如果吸光值過大或超過檢測范圍（A532＞1.5 或者 ΔA＞1.5 時），建議將樣本適當稀釋后進行測定。注意同步修改計算公式。
在線咨詢