免疫熒光技術(shù)主要靠觀察標(biāo)本的染色結(jié)果進(jìn)行抗原的鑒定和定位，因此標(biāo)本的制作十分重要。在制作標(biāo)本過程中應(yīng)力求保持抗原的完整性，并在染色、洗滌和包埋過程中不發(fā)生溶解和變性，也不擴(kuò)散至鄰近細(xì)胞或組織間隙中。標(biāo)本要求盡量薄些，以利抗原抗體接觸和鏡檢。標(biāo)本中干擾抗原抗體反應(yīng)的物質(zhì)要充分洗去，有傳染性的標(biāo)本要注意安全。
一：標(biāo)本的處理
. 涂片和印片 血液、細(xì)菌培養(yǎng)物、腦脊液、體腔滲出液和細(xì)胞懸液等均可簡單地涂抹在玻片上，干燥固定后就可用于熒光抗體染色。腦脊液、臟器（肝、脾、淋巴結(jié)等）、細(xì)菌菌落或尸體病變組織可把切面壓印于玻片上作成印片，經(jīng)固定后再染色。
. 組織切片 這是組織學(xué)和細(xì)胞學(xué)zui常用的顯微鏡標(biāo)本片。主要有以下兩種：①冷凍切片：為了使抗原zui大量的保存，的制片方法是冷凍切片，其優(yōu)點(diǎn)是操作簡單，組織的抗原性保存好，自發(fā)熒光較少，特異熒光強(qiáng)，同時(shí)適用于不穩(wěn)定的抗原，缺點(diǎn)是組織結(jié)構(gòu)欠清晰。②石蠟切片：石蠟切片是研究形態(tài)學(xué)的主要制片方法，它不但是觀察組織結(jié)構(gòu)的理想方法，而且可進(jìn)行回顧性研究。其優(yōu)點(diǎn)是組織細(xì)胞的精細(xì)結(jié)構(gòu)顯現(xiàn)清楚，但對抗原的保存量不如冷凍切片，并有組織自發(fā)熒光和非特異性熒光，需加酶消化處理。
. 細(xì)胞培養(yǎng)標(biāo)本 用HEP-2細(xì)胞或Hela細(xì)胞培養(yǎng)，待細(xì)胞在玻片上形成單層，固定后用作抗核抗體等檢測的抗原片。還可使細(xì)胞單層生長在玻片上，再用病毒或病人標(biāo)本感染，然后固定，用熒光抗體染色法檢測病毒。
. 活細(xì)胞染色 檢查淋巴細(xì)胞表面抗原以及免疫球蛋白受體、癌細(xì)胞表面抗原、血清中抗癌細(xì)胞抗體等，均可用活細(xì)胞熒光抗體染色法。當(dāng)同時(shí)觀察細(xì)胞表面兩種抗原的分布和相互關(guān)系時(shí)，可用雙標(biāo)記法進(jìn)行染色。
二：標(biāo)本的固定
標(biāo)本固定的作用不僅使細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)凝固，終止細(xì)胞內(nèi)酶反應(yīng)過程，防止細(xì)胞自溶，以保持細(xì)胞固有形態(tài)和結(jié)構(gòu)，更重要的作用是保存組織細(xì)胞的抗原性，防止標(biāo)本從玻片上脫落，除去妨礙抗體結(jié)合的類脂，易于保存。固定標(biāo)本的原則應(yīng)不損傷細(xì)胞的形態(tài)、細(xì)胞內(nèi)的抗原和細(xì)胞膜的通透性。
蛋白質(zhì)類抗原如血清蛋白質(zhì)和抗體，可用乙醇或甲醇固定；微生物抗原可用丙酮或三氯化碳固定；如需除去病毒的蛋白質(zhì)外殼，則可使用胰蛋白酶；多糖類抗原用10% 福而馬林固定或以微火加熱固定。如有粘液物質(zhì)存在，應(yīng)用透明質(zhì)酸酶等處理除去。類脂質(zhì)豐富的組織進(jìn)行蛋白、多糖抗原檢測時(shí)，需用有機(jī)溶劑（乙醚、丙酮等）處理除去類脂。
三：標(biāo)本的保存
標(biāo)本在固定干燥后，立即進(jìn)行熒光抗體染色及鏡檢。如必須保存時(shí)，則應(yīng)保持干燥，置4℃以下保存。一般細(xì)菌涂片或器官組織切片經(jīng)固定后可保存一個月以上。但病毒和某些組織抗原標(biāo)本抗原性喪失很快，數(shù)天后就失去其抗原性，需在-20℃以下保存。
在線咨詢