非洲豬瘟標(biāo)記抗體目前我國尚無本病的發(fā)生。但隨著貿(mào)易和人員交往的日益頻繁,該病傳入我國的風(fēng)險(xiǎn)是存在的,因此建立快速診斷方法十分必要。 為了建立ASFV特異抗體檢測方法,本研究根據(jù)國外發(fā)表的ASFV VP72基因序列設(shè)計(jì)引物,以英國動(dòng)物健康研究所提供的含VP72基因的質(zhì)粒為模板,擴(kuò)增VP72基因及其可溶性抗原片斷VP72S,將其插入pUC載體中進(jìn)行測序,所獲序列與已發(fā)表的ASFV-VP72(Ba71株)*相同。將測序正確的VP72和VP72S基因克隆入pGEX-6p-1載體中GST基因的下游,重組大腸桿菌用IPTG誘導(dǎo)表達(dá),并采用不同方法純化得GST融合蛋白。將VP72基因克隆入真核表達(dá)pcDNA3中,重組載體用多聚乙酸亞胺包裹后基因免疫8周齡小鼠,用制備的血清對(duì)原核表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行Western-blotting驗(yàn)證,結(jié)果表明,本實(shí)驗(yàn)原核表達(dá)的重組VP72是正確的,具有抗原性,可以作為檢測ASF特異抗體的抗原,并為特異單抗制備提供了免疫原。以表達(dá)的融合蛋白為包被抗原,以基因免疫鼠血清為陽性抗體,建立了檢測ASFV抗體的ELISA方法,可用于ASFV血清學(xué)診斷和流行病學(xué)調(diào)查。非洲豬瘟病毒體內(nèi)感染的主要細(xì)胞類型為單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng), 包括組織巨噬細(xì)胞和網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞, 也能在雞胚卵黃囊和骨髓細(xì)胞中增殖。在體外, 用于病毒分離培養(yǎng)的細(xì)胞分2類:一類為原代細(xì)胞, 主要為單核-巨噬細(xì)胞, 接種48h后, 細(xì)胞圓縮腫大, 隨后脫落、溶解;另一類為傳代細(xì)胞系, 比如豬腎細(xì)胞系 (PK) 、乳倉鼠腎細(xì)胞 (BHK-21) 、非洲綠猴腎細(xì)胞 (Vero) 以及豬細(xì)胞 (ST) 等, 但傳代細(xì)胞對(duì)野毒株較不敏感。一些分離株已適應(yīng)傳代細(xì)胞系, 并可以產(chǎn)生細(xì)胞病變。

非洲豬瘟標(biāo)記抗體

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